El treball Experimental

Disseny Global
Partim de soques homozigòtiques de fenotips salvatge, white i sèpia. Tres flascons de cada proporcionats pel CDEC

Tenint presents els Objectius de l'experiment,

Farem una resembra d'aquests flascons per a tenir-ne per a tots els grups. Cada grup rebrà sis flascons (2+, 2 se, 2w) i en treurà les mosques necessàries per als seus creuaments.

Amb aquestes soques realitzarem entre tots els següents creuaments tipus que identificarem com sembra PROGENITORS (P):

creuament	mascles	femelles "verges"
I	salvatge	sèpia
II	sèpia	salvatge
III	salvatge	white
IV	white	salvatge

La distribució dels creuaments en els diferents grups serà:

sembra (P)	Grups A(1, 2,...)	Grups B(1, 2,...)
I	2 flascons	--
II	--	2 flascons
III	--	2 flascons
IV	2 flascons	--

Cada creuament esmentat es farà amb 5 mascles i 5 femelles "verges" i a més per duplicat (així disminuirem riscos).

Un cop hi hagi larves dels descendents d'aquests creuaments caldrà eliminar-ne els progenitors i més tard, quan apareixin els descendents adults, anomenats PRIMERA GENERACIÓ FILIAL (F1), caldrà fer-ne un recompte (mínim cent mosques per a cada encreuament tipus).

Amb aquestes mosques F1, sembrarem la següent generació identificada com SEMBRA (F1):

sembra (F1)	Grups A(1, 2,...)	Grups A(1, 2,...)
I (F1)	2 flascons	--
II (F1)	--	2 flascons
III (F1)	--	2 flascons
IV (F1)	2 flascons	--

Quan sigui el moment, n'eliminarem les mosques F1 i més tard, quan aparegui la següent generació, identificada com SEGONA GENERACIÓ FILIAL (F2), en farem el recompte oportú, (mínim dues-centes mosques per a cada creuament tipus).

Temporització
Per començar l'experiment cal disposar de 10 setmanes consecutives (per exemple després de Nadal). Caldrà distribuir la feina en les diferents sessions de cada setmana.

SET 0 sembra dels flascons originals en el CDEC.

SET 1 Recollida de les soques originals (3 fl. salvatges, 3 fl. sèpia i 3 fl. white). Explicació dels objectius i procediments del treball. Caldrà que tot quedi molt clar abans de començar l'experiment!.
Practicar tècniques de manipulació sexat. Repàs del cicle biològic de Drosòfila.
Esterilització dels flascons per a resembra (6 per grup). Fer les farinetes. Posar a punt els eteritzadors. Preparar totes les etiquetes.

SET 2 Etiquetat i Resembra de les soques originals a l'Institut a 24ºC. per aconseguir un cicle de 15 dies. Per un supòsit de sis grups caldran 36 flascons de resembra (12+, 12w, 12se).

SET 3 Esterilització i preparació dels flascons amb farinetes de la generació (P). 24 flascons per a sis grups. Observació del cicle biològic

SET 4 SEMBRA P. SI CAL, FÒRA D'HORARI DE CLASSE !!).
Cada grup disposarà de pinzells, lupa, eteritzador, 6 flascons de resembra (de la set 2) i 6 flascons amb medi de cultiu per a fer la sembra (P). Cal aplicar el mètode d'obtenció de femelles "verges" .

SET 5 Controlar l'aparició de pupes en els cultius i eliminar els progenitors. esterilitzar flascons i fer farinetes. Per a sis grups 24 flascons.

SET 6 SEMBRA F1 a 25/26 grausC (es proporcionarà a cada grup quatre flascons amb medi de cultiu). Caldrà etiquetar-los i preparar-los.Recompte de les mosques F1 (mínim 100 per creuament tipus).

SET 7 Eliminació del progenitors F1

SET 8 Primer recompte de la F2. Cal comptar un mínim de dues-centes mosques de cada creuament tipus. però amb molta calma i fent servir lupa binocular!!!

SET 9 Segon i tercer recomptes de la F2. NETEJA DE TOT EL MATERIAL EMPRAT Tabulació conjunta dels resultats.

SET 10 Sessió informativa sobre el tractament de les dades CONJUNTES I DE GRUP. VALIDACIÓ de dades de grup. Sessions sobre la Xi-quadrat.

Quadern de laboratori
Cada grup informarà i portarà un registre de les incidències de cada sessió de treball.

Recomptes de mosques
Es proporcionarà a cada grup formularis de recompte per tal que anotin les seves dades. Aquest document no es passarà a "net" i constarà en la documentació dels resultats de grup.
Cal vigilar que els alumnes utilitzin la lupa binocular, ja que tendeixen a no fer-ho i això provoca errors en el sexat i per tant en els resultats (especialment quan es treballa amb mutants lligats al sexe)

Tabulació dels resultats
Cada grup tabularà els seus resultats.
Cada grup donarà les seves dades al professor per tal que en faci una taula global que penjarà en un lloc visible del laboratori i anirà actualitzant en cada recompte.

Models de formularis
- full de recompte 6K
- tabulació de resultats per grups 5K
- full de resultats globals 8k
- models d'herència 7k

Validació dels resultats
Com que segurament en algun grup es produiran errors de sexat (sovint confonen mascles joves amb femelles, sí no fan servir la lupa binocular!), és important que el professor invalidi aquells recomptes erronis i que no permetrien treure cap conclusió global respecte als objectius de l'experiment.

Per exemple, si en un recompte del que s'espera obtenir totes les femelles amb fenotip salvatge, apareixen femelles white, el professor detectarà l'error i l'invalidarà en la taula de resultats globals. Ja que l'ús d'aquestes dades no permetria treure conclusions respecte l'herència del mutant white.

Els grup afectats hauran de justificar les seves dades errònies.

Models d'herència
Cada grup, tenint presents els objectius del treball, haurà d'argumentar i proposar un model d'herència compatible amb els resultats globals (validats), alhora que desestimarà els no compatibles.

L'estadístic xi quadrat
L'ús d'aquest estadístic permet confirmar o refutar la hipòtesi següent:

"les dades experimentals (observades) són compatibles amb les dades teòriques (esperades) que poden deduir-se del model d'herència proposat"

Per als fonaments matemàtics millor acudir als experts (col·legues del departament de Mates). Només exposarem aquí l'ús pràctic de l'estadístic.
Caldrà fer la prova amb els recomptes F2

graus de llibertat	(p) probabilitat al nivell 0,05
1	3,84
2	5,99
3	7,82
4	9,49

(graus de llibertat = nombre de fenotips - 1)

Un valor calculat de la xi2<(p) permetrà acceptar la hipòtesi.
Un valor calculat de la xi2>(p) obligarà a refusar la hipòtesi.

Nosaltres però en fem un ús particular, com que els models assajats són vàlids,una xi2 massa alta ens indica no un model erròni, sino una recollida de dades errònia.

Les formules per a calcular la xi2 són

(vegeu un exemple):
Del recompte F2 del creuament I (+ x se), caldria esperar una proporció 3/4+ i 1/4se (model autosòmic recessiu),

F2	+	se	totals
observats	956	296	1252
esperats	939	313	1252

xi2 calculada = desv(+) + desv(se) = 0,28 + 0,97 = 1,26

Com que aquest valor és inferior a 3,84 (p, per 1 grau de ll.) podem acceptar la hipòtesi (les dades observades estan d'acord amb el model proposat).